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中性转化酶(NI)测试盒微量法
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更新时间:2023-12-26  |  阅读:522

详情介绍

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

中性转化酶(NI)测试盒微量法

100管/48样

微量法

BK-01S6711

商品介绍:

测定意义:

蔗糖转化酶(InvertaseIvr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,将高等植物Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。                          

NI主要存在于细胞质中,负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。

测定原理:

NI催化蔗糖分解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

50T 流行性出血热汉坦病毒PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

0.1mg 山羊抗小鼠IgG,荧光素488标记 Goat Anti-Mouse IgG ,IF488 Conjugate  4℃保存

2 ug pBIND pBIND 低温运输,-20℃保存

10mL TE缓冲液,PH8.5  

2 ug pFastBac1 pFastBac1 低温运输,-20℃保存

沙氏葡萄糖液体培养基(2015药典) Sabouraud Dextrose Broth 250g

1瓶 C3H/10T1/2,Clone 8细胞株 C3H/10T1/2,Clone 8 低温运输和保存

大肠菌群显色培养基 Coliform Chromogenic Medium 1000(ML)

50U T4 DNA 聚合  T4 DNA Polymerase -20℃保存

500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH4.4   Phosphate Buffer,0.2M, pH4.4   常温保存

0.1mL×10 BL21(DE3)化学感受态细胞 BL21 (DE3) Competent Cell -80℃保存

中性转化酶(NI)测试盒微量法Rabbit anti-human IgM whole serum  兔抗人IgM抗清 规格: 1ml

Lingo-1  Nogo受体反应蛋白抗体 规格: 0.1ml

Adenovirus 5 E1A  毒早期E1A蛋白抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-human sIgA/Cy7  Cy7标记的兔抗人分泌型IgA 规格: 0.1ml

Peptide YY/PYY  酪酪肽抗体 规格: 0.2ml

HIG1/HIGD1A  缺氧诱导基因1蛋白抗体 规格: 0.2ml

ART4/CD297  二磷酸苷核糖基转移4抗体 规格: 0.2ml

VEGF  管内皮生因子抗体 0.1ml

CQ028  多基因下调蛋白抗体 规格: 0.2ml

APE/Girdin  肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体 规格: 0.1ml

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的小鼠抗兔IgM 规格: 0.1ml

beta-Amyloid(31-35)  β淀粉样肽(31-35)抗体 规格: 0.1ml

 


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