NS0 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

NS0 残留DNA 检测试剂盒是用于定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成 品中残留的 NS0 宿主细胞残留 DNA。

本试剂盒利用 Taqman 探针法，定量检测样本中NS0 残留 DNA 。该方法具有速度快、 特异性高、  性能可靠且检测限可达到 fg 级别。

试剂盒组份：

试剂装量贮存条件

NS0 control DNA40ul×1 管-20oC

DNA dilution buffer6ml ×1 瓶-20oC

2×Taqman master mix (+UNG/ROX)0.75ml ×2 管-20oC

10×NS0 qPCR mix0.3ml ×1 管-20oC

RNase-Free H2O1.5ml×1 管-20oC

规格 ：100  反应

适用机型：

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

实验所需但试剂盒未包含材料：

Ø 1.5ml 无菌低吸附离心管

Ø 96 孔 qPCR  板

Ø 一次性手套

Ø 1000ul 、100ul 、10ul 无菌低吸附带滤芯移液枪头

相关设备：

Ø 离心机

Ø 涡旋振荡器

Ø 荧光定量 PCR 仪

Ø 1000ul 、100ul 、10ul 移液器

NS0 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)qPCR 程序参数设置(以 ABI 7500 为例)：

1.创建空白新程序，选择绝对定量检测模块。

2.创建新检测探针，命名为 NS0-DNA，选择报告荧光基团为 FAM，淬灭基团为 none,检测 参比荧光为 ROX。

3.设置两步法反应程序： 50oC 2min, 95oC 预变性 10min；95oC 10 sec，55oC 1min，40 个循环； 反应体积为 30ul。

qPCR 结果分析(以 ABI 7500 为例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 将 Threshold 设置为 0.05 ，点击 Analyze，此时可 初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2.在 Results 的 Plate 面板中，将标准曲线孔的 Task 一栏设置为 Standard，并且在 Quantity 一栏分别赋值为 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03 (含义为每孔的 DNA 量， 单位为 pg)， 并且 在相应 的 Sample Name 一栏命名为 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。

3.在 Results 的 Plate 面板中，将无模板对照 NTC 孔的 Task 一栏设置为 NTC，将阴性质控NEG 孔、待测样本孔、样本 ERC 孔的 Task 一栏设置为 Unknown，并且在相应的 Sample Name 一栏中命名为 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后点击开始键。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中，可读取标准曲线的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2

5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一栏可读取无末班对照 NTC、阴性质控 NEG、 待测样本、样本 ERC 的检测值。后续可在检测报告中将单位换算为 pg/ml  样本。

注:NS0 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)根据待测样本和样本 ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在 50%- 150%之 间。

50mgFrigoribacteriumHuman C10orf58(Redox-regulatory protein FAM213A) ELISA Kit

25g大肠杆菌Human NY-ESO-1(Cancer/testis antigen 1) ELISA Kit

5g枯草芽胞杆菌Human Caspase 12 ELISA Kit

1g菊异茎点霉Human CD320 ELISA Kit

5g苍黄链霉菌Human TMPRSS15(Enteropeptidase) ELISA Kit

25g假单孢菌Human SPAST(Spastin) ELISA Kit

5g大肠埃希氏菌Human TOM20(translocase of outer mitochondrial membrane 20 homolog) ELISA Kit

1g三叶草根瘤菌Human MLKL(mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit

5g委内瑞拉链霉菌Human HSD3B7(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 7) ELISA Kit

100g红色红曲菌 Human MVK(Mevalonate kinase) ELISA Kit

25g冬虫夏草Human CRTC2(CREB-regulated transcription coactivator 2) ELISA Kit

100g莫哈韦芽孢杆菌Human total SOD(superoxide dismutase) ELISA Kit

25g海洋杆菌Human CD97(CD97 antigen) ELISA Kit

5g暗孢节菱孢Human TLR8(Toll-like receptor 8) ELISA Kit

1g鸭艾美耳球虫Human peptidoglycan(peptidoglycan) ELISA Kit

5g就地堆肥地芽孢杆菌Human TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit

25g大肠杆菌987P因子血清Human IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit

NS0 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)假单胞F琼脂人神经细胞  原代肾实质细胞特制基础无血清培养基Protein A  蛋白A

EC肉汤人海马趾神经细胞  原代神经元细胞特制基础无血清培养基Beta-Amyloid (31-35)  β淀粉样肽31-35（多肽蛋白）

EC肉汤人少突胶质前体细胞-贴壁生长   原代神经胶质细胞特制基础无血清培养基Beta-Amyloid(1-28)  β淀粉样肽1-28（多肽蛋白）

伊红美蓝琼脂（EMB)人少突胶质前体细胞-悬浮生长   原代单核细胞特制基础无血清培养基Beta-Amyloid(1-40)  β淀粉样肽（1-40）（多肽蛋白）

伊红美蓝琼脂（EMB)人少突胶质细胞   原代软骨细胞特制基础无血清培养基A Beta1-40 (mutation type, MT) peptide  突变型β淀粉样肽1-40

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