CHO 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

 试剂盒简介：

CHO 残留DNA 检测试剂盒是用于定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成 品中残留的 CHO  宿主细胞 DNA。

本试剂盒利用 Taqman 探针法， 定量检测样本中 CHO  残留 DNA。该方法具有速度快、 特异性高、  性能可靠且最di检测限可达到 fg 级别。

试剂盒组份：

表 1：试剂盒组份

规格 ：100  反应

适用机型：

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

实验所需但试剂盒未包含材料：

Ø 1.5ml 无菌低吸附离心管

Ø 96 孔 qPCR  板

Ø 一次性手套

Ø 1000ul 、100ul 、10ul 无菌低吸附带滤芯移液枪头

相关设备：

Ø  离心机

Ø 涡旋振荡器

Ø 荧光定量 PCR 仪

Ø 1000ul 、100ul 、10ul 移液器

CHO 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)qPCR 程序参数设置(以 ABI 7500 为例)：

1.创建空白新程序，选择绝对定量检测模块。

2.创建新检测探针，命名为 CHO-DNA，选择报告荧光基团为 FAM，淬灭基团为 none,检测 参比荧光为 ROX。

3.设置两步法反应程序： 50oC 2min, 95oC 预变性 10min；95oC 10 sec，60oC 1min，40 个循环； 反应体积为 30ul。

qPCR 结果分析(以 ABI 7500 为例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 将 Threshold 设置为 0.05 ，点击 Analyze，此时可 初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2.在 Results  的 Plate 面板中，将标准曲线孔的 Task 一栏设置为 Standard，并且在 Quantity 一栏分别赋值为 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03  (含义为每孔的 DNA 量， 单位为 pg)， 并且

在相应的 Sample Name 一栏命名为 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。

3.在 Results 的 Plate 面板中，将无模板对照 NTC 孔的 Task 一栏设置为 NTC，将阴性质控 NEG 孔、待测样本孔、样本 ERC 孔的 Task 一栏设置为 Unknown，并且在相应的 Sample Name 一栏中命名为 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后点击开始键。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中，可读取标准曲线的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2 。

5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一栏可读取无末班对照 NTC、阴性质控 NEG、 待测样本、样本 ERC 的检测值。后续可在检测报告中将单位换算为 pg/ml  样本。

注:根据待测样本和样本 ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在 50%- 150%之 间。

1g立枯丝核菌Human Fcγ(Fc Fragment of IgG) ELISA Kit

25g盘长孢状刺盘孢Human miRNA-210 ELISA Kit

5g红鬼笔Human anti-SARS-CoV2(N) IgG ELISA Kit

25g伯克霍尔德菌Human ALOX5(Arachidonate Lipoxygenase 5) ELISA Kit

5g环圈链霉菌Human Hsd17b13( 17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 13) ELISA Kit

1g毒青霉Human SEPTIN7(septin-7) ELISA Kit

5g阿舒假囊酵母Human anti-SARS-CoV2(N) IgM ELISA Kit

1g曲霉属Human anti-2019 nCoV(S) IgM ELISA Kit

5g解脂假丝酵母Human anti-2019 nCoV(S) IgG ELISA Kit

25MG白布勒担孢酵母Human OTUD5(OTU domain containing 5) ELISA Kit

25g白灵侧耳Human MARK2 ELISA Kit

5g灵芝属Human MARK3 ELISA Kit

1g黑木耳Human MARK1 ELISA Kit

250mg美澳型核果褐腐病菌Human MARK4 ELISA Kit

100g玉米大斑病菌Human MARS ELISA Kit

25g棕褐小单孢菌Human MARVELD2 ELISA Kit

10mg猴头Human C1orf31(Cytochrome c oxidase assembly factor 6 homolog) ELISA Kit

CHO 残留 DNA 检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

Kovacs氏靛基质试剂人脑微血管内皮细胞  原代上皮细胞特制基础无血清培养基BSA (bovine serum albumin)  牛血清白蛋白（第五组分）

V-P甲、乙液试剂人脑血管平滑肌细胞  原代内皮细胞特制基础无血清培养基KLH (keyhole limpet hemocyanin)  血蓝蛋白

1%亚碲酸溶液人脑血管外膜成纤维细胞  原代平滑肌细胞特制基础无血清培养基OVA (ovalbumin)  鸡卵白蛋白

亮绿琼脂人脑血管周细胞  原代成纤维细胞特制基础无血清培养基THY (thyroglobulin,TG)  甲状腺球蛋白

平板计数琼脂（PCA)人脉络丛内皮细胞  原代心肌细胞特制基础无血清培养基HSA/human Serum albumin  人血清白蛋白

假单胞分离琼脂人脉络丛成纤维细胞  原代系膜细胞特制基础无血清培养基Streptavidin, SA  链霉亲和素

假单胞分离肉汤人脑膜细胞  原代肝实质细胞特制基础无血清培养基Protein G/FITC  FITC标记蛋白-G