细胞培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

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公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。公司产品仅用于科研，不得用于临床．

注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
腺苷酸环化酶9抗体

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人海马星形胶质细胞HA-hDNTPSET*DRYICE*dNTP套装生物技术级1 KitFrozen

Hs 181.Tes细胞，正常人细胞 人癌细胞,HCC1937细胞 平滑肌细胞培养基SMCM-sf2-录 2-Chlorothiophqnq 96-43-2

黄牛皮肤细胞;BTA-S2AMMONIUMSULFATE胺蛋白组学级5KG7783-20-2RT

KLK13 Others Human 人 KLK13 / Kallikrein-13 人细胞裂解液 (阳性对照) 昆布多糖100克

CM-H052人胎盘绒毛膜细胞*培养基100mL143-15-7溴代十二烷1-BroMododecane
TNFRSF14 Others Human 人 TNFRSF14 / HVEA / HVEM 人细胞裂解液 (阳性对照) 丽春红2R(BS)Ponceau 2R质量规格：BS

人肾小球内皮细胞HRGEC孟加拉玫瑰红,酸性红94Rose bengal质量规格：AR

HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 偶氮荧光桃红,酸性红1Azophloxine质量规格：BS

大鼠小肠血管内皮细胞*培养基 100mL曙红Y,醇溶剂红 43Eosin Y ,alcohol solution质量规格：AR

Raji人Butt's瘤细胞 Raji human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS曙红BEosin B质量规格：BS
人膀胱移行细胞癌细胞铂耐药株EB病毒转化的人B细胞;KMY0903 新生儿表皮角化细胞*培养基 100mLC12E10，10%溶液质量规格：BRC12E10

成纤维细胞培养基FM-acfC12E9, 10%溶液质量规格：BRC12E9

Spike Others MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 367-606) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)质量规格：>98%,BRMagenta-Gal

双位点HC-kit受体细胞株;DMF7柠檬酸镁九水(>98%,BR)质量规格：>98%,BRMagnesium  nonahydrate

大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1) 胶质瘤细胞，SHG-44细胞 W6/32细胞，小鼠B细胞杂交瘤细胞十二烷基硫酸镁(分子生物学)质量规格：>85%,分子生物学级Magnesium dodecyl sulfate
细胞接受后的处理：
1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的的*培养基。
4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，