细胞培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

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公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。公司产品仅用于科研，不得用于临床．

注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
腺苷酸环化酶9抗体

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人脑星形胶质母细胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG]Fluridone1-甲基-3-本基-5-(3-三扶甲基本基)-4(1H)-酮150u高，95%

HBZY-1细胞，人肾小球髓母细胞 大鼠埀体瘤细胞,GH3细胞 CL-0210SiHa(人颈鳞癌细胞)5×106cells/瓶×2酚(异构体混和物) Crqsol 1319-77-3

Vero(非洲绿猴肾细胞) 5×106cells/瓶×2C.L.E.D培养基shēng huà shì jì容量：200张/盒

NHEM-c M2 adult 正常人表皮素细胞(NHEM)成年捐献者(M2培养液中培养) 500,000cells 胎盘羊膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)ADPDIwo7ium7iHYDRATE 5'-二嶙酸腺苷二钠超级白色结晶粉末FROZENsigma

骨细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3-基基氧硅烷NA
NCI-H460(人肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 肾动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)胰酶(1:4500)Pancreatin质量规格：酶活1:4500,BR

支原体PCR检测试剂盒MYCO枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君Orphenadrine 质量规格：>98%,BR

IL12A & IL12B Others Human 人 IL12A & IL12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) β-半乳糖苷酶β-Galactosidase质量规格：700u/mg，罗氏分装

CatS2 家猫皮肤成纤维样细胞脱落酸(标准品)Abscisic acid,S-ABA质量规格：98%,标准品

CL-0070CRFK(猫肾细胞)5×106cells/瓶×2脱落酸(高)Abscisic acid,S-ABA质量规格：98%,BR
人肺巨细胞癌细胞(低转移)CDH12 Others Human 人 CDH12 人细胞裂解液 (阳性对照) 丙二酸(AR)Malonate质量规格：>99.5%,AR

人滑膜细胞HS四水Manganese (II) chloride, tetrahydrate质量规格：>98%

EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人细胞裂解液 (阳性对照) 干酪素Casein质量规格：BR

大鼠肝动脉内皮细胞*培养基 100mL医用凡士林Vaseline质量规格：BR

HMy2.CIR人B母细胞 HMy2.CIR human B lymphoblastoid cell IMDM培养基(GIBCO)+20%FBS原钒酸钠 orthovanadate质量规格：>96%,BR
细胞接受后的处理：
1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的的*培养基。
4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，