细胞培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。公司产品仅用于科研，不得用于临床．

注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
腺苷酸环化酶9抗体

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

CM-H072人肾成纤维细胞*培养基100mL液体改良马丁培养基shēng huà shì jì容量：250毫升

小鼠畸胎瘤细胞;F9 小鼠肠微血管细胞*培养基 100mL2-溴嘧啶 2-Bromopyrimidinq 4292-60-

RLF, 大鼠成纤维细胞 Rattus银丝，英文名或英文缩写：Silver，级别：BR，99%，规格：100克

EPHB3 Others Mouse 小鼠 EPHB3 / HEK2 人细胞裂解液 (阳性对照) 芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-酪酸shēng huà shì jì容量：RT，避光5克

EB病毒转化的人B细胞;KMY09051988-6-22，4，6-三录本酚 98%2,4,6-Trichloropxenol
Promocell C-26030 Renal Epithelial Cell GrowthMedium 2, 肾上皮细胞生长培养基2型(即用型) 500ml羌活醇（标准品）Notopterol质量规格：HPLC≥98%，标准品

上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)10-羟基癸酸（标准品)10-Hydroxydecanoic acid质量规格：HPLC≥96%，标准品

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/4664T/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 羟基红花黄色素A(标准品)Hydroxysafflor yellow A质量规格：HPLC≥98%,标准品

KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株;LⅡ马兜铃酸A去甲基代谢产物Aristolochic Acid Ia质量规格：美国进口

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414) 前列腺癌细胞，RM-1细胞 S37细胞，小鼠肉瘤细胞羟基积雪草苷（标准品）Madecassoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
大鼠鼻咽癌细胞Promocell C-24010 MelanocyteGrowthMedium , 色素细胞生长培养基(即用型) 500ml鸟苷酰(2' 5')腺苷铵盐Guanylyl(2' 5')adenosine ammonium salt 质量规格：美国进口

骨骼肌细胞培养基SkMCM-prf5‘-O-乙酰腺苷5'-O-Acetyl Adenosine  质量规格：美国进口

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 2-（标准品）2-Phenylacetamide质量规格：系统适应性

人胚肾细胞(SV40T基因修饰);293T/17依诺沙星(标准品）Enoxacin质量规格：含量测定

大鼠骨骼肌成肌细胞;L6 恶性色素瘤细胞，A-375[A375]细胞 RF/6A细胞，绿猴猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞[Nle4,DPhe7] a-促激素酰胺; 美拉诺坦 I[Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I质量规格：>95%,BR
细胞接受后的处理：
1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的的*培养基。
4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，