乳酸脱氢酶（LDH）测试盒微量法－上海帛科生物技术有限公司

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乳酸脱氢酶（LDH）测试盒微量法

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更新时间：2023-12-29 | 阅读：463

详情介绍

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称	规格	检测方法	货号
乳酸脱氢酶（LDH）测试盒微量法	100管/48样	微量法	BK-01S6325

商品介绍：

测定意义

测定意义:

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

实验结果判断我有妙招：

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。

3、以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性，P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑，P／N小于1．5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照，与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求：

① 易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂，应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放其水溶液，亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放，钾，钠，白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存，其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。

操作步骤：

1. 样品的准备：

a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作：

a. WST-8酶工作液的配制：参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

100次肽还原检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

250mL Maleate Buffer（马来酸缓冲液）,0.2M,pH6.0 Maleate Buffer,0.2M,pH6.0 常温保存

25OD G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低温运输，-20℃保存

幽门螺旋杆菌固体培养基 Helicobacter Pylori Medium 250g

1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]细胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低温运输和保存

葡萄糖肉浸液肉汤 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

100g 纤维素 DE-52 Cellulose，DE-52 室温干燥保存

50mL Zinc Acetate Solution（乙酸锌溶液）,100mM Zinc Acetate Solution,100mM 常温保存

5g 脱氧胆酸钠 Sodium Deoxycholate 常温保存

2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低温运输，-20℃保存

乳酸脱氢酶（LDH）测试盒微量法CMT/Icmt 异戊烯半胱羧基甲基转移抗体规格: 0.2ml

BAP31 BAP31蛋白抗体规格: 0.1ml

glypican 1 磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗体规格: 0.2ml

ORAV1 口腔高表达的蛋白1抗体规格: 0.2ml

FGF16 成纤维细胞生因子16抗体规格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC FITC标记的鼠抗人IgG单克隆抗体规格: 0.1ml

phospho-LCK(Tyr394) 磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪激抗体规格: 0.1ml

Sin3b 转录抑制蛋白Sin3b抗体规格: 0.2ml

phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17) 磷酸化心脏磷蛋白抗体规格: 0.1ml

GABR B3/GABA A Receptor beta 3 G氨基丁酸受体3抗体规格: 0.2ml

PDK2 丙酮酸脱激亚型2抗体规格: 0.2ml

BOb-1/POU2AF1 B细胞特异性转录因子抗体规格: 0.1ml

特别提醒：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。

产品名称：乳酸脱氢酶（LDH）测试盒微量法

产品规格：100管/48样

检测方法：微量法

产品货号：BK-01S6325

产品分类：辅酶Ⅰ系列
商品介绍：

测定意义

测定意义:

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验

样本和试剂浪费！

1、样本制备

① 组织样本：

取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取

② 细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；

12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10

4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

实验方法学：

一、肝素的配制：

市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集：

全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点：

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。