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亚硝酸还原酶(NiR)测试盒可见分光光度法
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更新时间:2023-12-28  |  阅读:970

详情介绍

商品介绍:

测定意义:

硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为NONH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理

亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少,即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

亚硝酸还原酶(NiR)测试盒可见分光光度法

50管/24样

可见分光光度法

BK-01S6481

11.png 

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

100mL 植酸 Phytic Acid 室温阴凉保存

50T 人细小病毒B19PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

5 g  Glucosamine (胰岛素抵抗诱导剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

25mL Denhardt’s Solution,50X Denhardt’s Solution,50X 常温保存

5次 超快核酸转膜试剂盒B(尼龙膜) Rapid Nucleic Acid Blotting Kit 常温

2 ug pIEXBac-c-EGFP-4 pIEXBac-c-EGFP-4 低温运输,-20℃保存

曲琼脂基础(AFPA) AFPA 250g

1瓶 K562细胞株 K562 低温运输和保存

LB肉汤(Lennox) LB Broth 250g

250U 腺苷脱氨 Adenosine Deaminase 4℃保存

250mL Sodium Phosphate Buffer(钠缓冲液),0.5M,pH7.5  Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.5  常温保存

亚硝酸还原酶(NiR)测试盒可见分光光度法MYH9  肌球蛋白重链9抗体 规格: 0.2mlSA2  粘结蛋白SA2抗体 规格: 0.2ml

phospho-PKC delta (Thr505)  磷酸化蛋白激C亚性D型抗体 规格: 0.1mlCCL20/MIP3 alpha  巨噬细胞性蛋白MIP-3a抗体 规格: 0.1ml

APOE/Apo E2  载脂蛋白E抗体 规格: 0.1mlFOXN1  叉蛋白N1抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的兔抗鸡IgG 规格: 0.1mlRabbit Anti-Monkey IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗猴IgM 规格: 0.1ml

ARHGAP20  Rho GTP激活蛋白20抗体 规格: 0.2mlARHI  抑基因ras同源家族1抗体 规格: 0.2ml

p53R2/RRM2B  核苷酸还原M2B抗体 规格: 0.1mlKLHL24  Kelch样蛋白24抗体 规格: 0.2ml

SEPT14  细胞分化蛋白SEPT14抗体 规格: 0.2mlHOXA11  同源盒蛋白HOXA11抗体 规格: 0.1ml

UBC6e/UBE2J1  泛素结合E2J1抗体 规格: 0.2mlRNF12  环指蛋白12抗体 规格: 0.2ml

MEK5/MAP2K5  丝裂原活化蛋白激激5抗体 规格: 0.1mlSCNN1B/βENaC  上皮钠通道β抗体 规格: 0.2ml

phospho-IGF1R(Tyr1161)  磷酸化胰岛素样生因子1受体抗体 规格: 0.1mlGrpa  半糖凝集素相关蛋白A抗体 规格: 0.2ml

ELF1/E74 like factor 1  转录因子ELF1抗体 规格: 0.2mlMAP4K4  丝裂原活化蛋白激MAP4K4抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-rat IgM/RBITC  罗丹明标记的兔抗大鼠IgM 规格: 0.3ml

 


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