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亚硝酸还原酶(NiR)测试盒微量法
参考价:

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更新时间:2023-12-28  |  阅读:846

详情介绍

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:亚硝酸还原酶(NiR)测试盒微量法

产品规格:100管/48样

检测方法:微量法

产品货号:BK-01S6480

产品分类:氮代谢系列
商品介绍:

测定意义:

硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为NONH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理

亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少,即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

50T 副猪嗜血杆菌定量PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

V-P试剂盒  5ml*4

1瓶 Lec1细胞株 Lec1 低温运输和保存

改良麦康凯肉汤添加剂 Modified MacConkey Broth Additives 1ml*5支

100mg 胶原Ⅰ型 Collagenase TypeⅠ 4℃保存

250mL Stripping Buffer,4X Stripping Buffer,4X 常温保存

100次 一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒 One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit 4℃保存

2 ug pSIREN-RetroQ-ZsGreen pSIREN-RetroQ-ZsGreen 低温运输,-20℃保存

100mL Oligo(dT)再生溶液 Oligo (dT) Recharger 常温避光保存

2 ug pCMV-SPORT6 FLJ21908 pCMV-SPORT6 FLJ21908 低温运输,-20℃保存

CHO培养基基础 CHO Medium Base 250g

亚硝酸还原酶(NiR)测试盒微量法Phospho-Ret (Tyr905)  磷酸化指状蛋白RET抗体 规格: 0.1ml

FAM161B  FAM161B蛋白抗体 规格: 0.2ml

Phospho-BRCA1(Ser1524)  磷酸化易基因1抗体 规格: 0.1ml

HAUSP/USP7  疱疹毒相关泛素特异性蛋白7抗体 规格: 0.2mlTRAILR2/DR5/CD262  瘤细胞调亡素/死亡受体5抗体 规格: 0.1ml

GDN/SERPINE2  胶质源性连接蛋白抗体 规格: 0.2mlGPBB/PYGB  脑糖原磷酸化抗体 规格: 0.2ml

FBXL5  FBXL5蛋白抗体 规格: 0.2mlARSA  芳香基硫酸酯1抗体 规格: 0.2ml

RNASE4/Angiogenin  管生成素核糖核酸4抗体(肌萎性侧索硬化症蛋白) 规格: 0.1mlBcl2A1  BCL2相关蛋白A1抗体 规格: 0.1ml

DR3/APO3/TWEAK  死亡受体3抗体 规格: 0.1mlArfaptin 2  ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体 规格: 0.2ml

ADAM11  去整合素样金属蛋白11抗体 0.2mlPAK1  p21激活激1抗体 规格: 0.1ml

Phospho-DARPP32(Thr34)  磷酸化多巴胺/cAMP调节神经磷蛋白抗体 规格: 0.1mlIKAROS  锌指蛋白IKAROS抗体 规格: 0.2ml

Aurora A/ARK-1/AURKA  有丝分裂激A抗体 规格: 0.1mlKAT2B/ GCN5/PCAF  组蛋白乙酰转移PCAF抗体 规格: 0.1ml

CK8  细胞角蛋白8抗体 规格: 0.1mlMAGEF1  黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗体 规格: 0.2ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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