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磷脂酶D(PLD)测试盒微量法
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更新时间:2023-12-26  |  阅读:554

详情介绍

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

磷脂酶D(PLD)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6655

商品介绍:

测定意义:

磷脂酶DEC3.1.4.4)即磷脂酰水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理

磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和,在氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基和重蒸酚氧化成粉红色物质,在500nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、微量石英比色皿、恒温水浴锅,无水乙醇。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

 

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

1 mg Rhod-2,三钠盐 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

250mL Carbonate Buffer(盐缓冲液),0.5M,pH9.5   Carbonate Buffer,0.5M,pH9.5   常温保存

25mL 亲和硅烷  Binding Silane 常温

2 ug pGTf2 pGTf2 低温运输,-20℃保存

盐琼脂 Mannitol Salt Agar 250g

1瓶 HP615细胞株 HP615 低温运输和保存

瓷珠菌种保存管(50支) Strain Store Medium 50支/盒

10g 干粉 Lysozyme Powder 4℃或-20℃保存

250mL Sodium Bicarbonate Buffer(钠缓冲液),1M,pH9.0   Sodium Bicarbonate Buffer,1M,pH9.0   常温保存

1 管 Rosetta-gamiB(DE3)plysS大肠杆菌 Rosetta-gami B(DE3)plysS E.coli Strain -80℃保存

2 ug pSos MAFB pSos MAFB 低温运输,-20℃保存

磷脂酶D(PLD)测试盒微量法CD46/MCP  膜辅蛋白抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgG 规格: 0.1ml

ALDH1  乙醛脱1型抗体 规格: 0.2ml

IGSF2/CD101  CD101抗体 规格: 0.2ml

CENPF  有丝分裂着丝粒蛋白F抗体 规格: 0.2ml

WNT5A  信号通路Wnt5a抗体 规格: 0.1ml

Phospho-Mre11 (Ser676)  磷酸化DNA损伤关键蛋白Mre11抗体 规格: 0.1ml

Natriuretic Peptide Receptor A  利钠肽受体A抗体 规格: 0.2ml

Tetraspan 5  四分子交联体5抗体 规格: 0.1ml

gamma crystallin S  γ晶状体蛋白S抗体(γS-crystallin) 规格: 0.2ml

FAM120B  组织激活过氧化活化增生受体γ蛋白抗体 规格: 0.2ml

WSB2/WD SOCS box protein 2  信号传导抑制蛋白WD重复蛋白2抗体 规格: 0.2ml


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