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土壤羟胺还原酶(HR)测试盒可见分光光度法
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更新时间:2023-12-25  |  阅读:474

详情介绍

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

土壤羟胺还原酶(HR)测试盒可见分光光度法

50管/24样

可见分光光度法

BK-01S6871

商品介绍:

测定意义:

土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨,土壤中的还原态化合物可作为氢的供体,其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失,间接影响氮肥的利用效率。

测定原理

硫酸铁铵中的Fe3+可将羟胺氧化为氮气,自身被还原为Fe2+Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗琳形成橙红色配合物,在510nm处有吸收峰,羟胺还原酶作用于羟胺,使配合物形成量减少,510nm处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、1 mL玻璃比色皿/96孔板、震荡仪、氮吹仪。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

5g 苏丹Ⅲ Sudan Ⅲ 室温保存

50T 玉米MON810 PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

15次 植物线粒体纯化试剂盒 Plant  Mitochondria Purification Kit 常温保存

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5  HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5  常温保存

0.5mL 探针标记专用PCR Mix   

2 ug pLOX-TERT-iresTK pLOX-TERT-iresTK 低温运输,-20℃保存

根瘤菌  250g

1瓶 NCI-H157细胞株 NCI-H157 低温运输和保存

SOC SOC Medium 250g

2mg  Aprotinin 4℃保存

1000mL Tris Buffered Saline(TBS),20X  Tris Buffered Saline(TBS),20X  常温保存

土壤羟胺还原酶(HR)测试盒可见分光光度法LSP1  白细胞F肌动蛋白结合蛋白抗体 规格: 0.2ml

PAR4  蛋白激活受体4抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-Bov IgG/RBITC  罗丹明标记的小鼠抗牛IgG 规格: 0.1mlKLHL26  Kelch样蛋白26抗体 规格: 0.2ml

TFR2/Transferrin Receptor 2  转铁蛋白受体2抗体 规格: 0.2mlHOXB5  同源盒蛋白HOXB5抗体 规格: 0.1ml

SOX9/SRA1  转录因子SOX9蛋白抗体 规格: 0.1mlTULP2/CT65/Cancer testis antigen 65  瘤/睾抗原65 规格: 0.2ml

ERK4  细胞外信号调节激4抗体 规格: 0.1mlAngiotensin II type 1A receptor  管紧张素Ⅱ1A型受体抗体 规格: 0.1ml

CCL16/HCC-4  巨噬细胞性蛋白16抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/FITC  FITC标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.3ml

KCTD5  钾离子通道四聚体结构域蛋白5抗体 规格: 0.2mlStanniocalcin 1  斯钙素抗体 规格: 0.1ml

PI3K/PI3 kinase p85 alpha subunit  磷脂酰肌醇激抗体 规格: 0.1mlTRIM7/RNF90  糖原生成素相互作用蛋白抗体 规格: 0.2ml

HBV pre S1/S2 protein  人乙肝毒pre S1/S2蛋白抗体 规格: 0.1mlDUSP13  双特异性磷酸13抗体 规格: 0.2ml

MST4  丝/苏蛋白激MST4抗体 规格: 0.2mlBMP2  骨形态发生蛋白2抗体 规格: 0.1ml

PASK/STK39  丝/苏蛋白激39抗体 0.2mlYB1  y-盒结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml

 


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