详情介绍
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
葡萄孢菌PCR检测试剂盒价格 | Botrytis cinerea PCR | BK-P8902 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
RN-c, 大鼠皮质神经元苜蓿中华瘤菌
MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞肺腺
DAB Kit/DAB显色试剂盒20m、60ml国产
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae大鼠肠静脉内皮细胞*培养基
狗肺成纤维样细胞NCI-H1688(人典型小细胞肺细胞)
人肝细胞英文名称:Bel-7402
MDA-MB-435(人腺高转移细胞)5×106cells/瓶×2gersion
吴茱萸碱固氮类芽胞杆菌 Paenibacillus azotoformans
酶水解干酪素/酶水解酪蛋白/水解干酪素(酶)/Casein HydrolysateBR250克国产/进口
OP9(小鼠骨髓基质细胞)5×106cells/瓶×2
粘蛋白20(MUC20)重组蛋白英文名称:Recombinant Mucin 20 (MUC20)
葡萄孢菌PCR检测试剂盒价格Toll样受体4(TLR4)重组蛋白 Recombinant Toll Like Receptor 4 (TLR4)
DH82(犬巨噬细胞)5×106cells/瓶×2
贝叶多孔菌
香菇 Lentinula edodes克鲁斯假丝酵母 Candida krusei
耶路撒冷沙门氏菌 Salmonella jerusalemPIEC(猪髋动脉内皮细胞 )
哈茨木霉荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens
小鼠白血病细胞G-CSF依赖性 NFS-60
费氏中华瘤菌 Sinorhizobium fredii弗氏链霉菌* Streptomyces fradiae
施氏汉逊酵母 Hansenula schnegg杆菌属 Lactobacillus sp.
粗柄羊肚菌 Morchella crassipas中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii
肠道菌增菌肉汤(E E) 规格: 250g 用途: 用于肠道菌的增菌培养