ELISA(酶联免疫吸附实验)试剂盒是一种用于测量蛋白质、抗体或其他分子浓度的常用检测工具。它通常由塑料微孔板和预涂有特定抗体或蛋白质的试剂盒组成,可以方便、快速、准确地检测样品中目标物质的存在以及其浓度大小。
ELISA试剂盒代测实验步骤如下:
1. 实验准备
试剂:预包被酶标板、标准品、化检测抗体、SABC工作液、显色液、终止液等
仪器:酶标仪、自动洗板机、恒温箱、移液器等
样本:血清/血浆/细胞培养上清等,需按标准方法处理
2. 标准品稀释
准备6个离心管,标记S2-S7和blank
各管加入200μl标准品稀释液,按梯度稀释标准品
稀释后浓度梯度:640pg/ml、320pg/ml、160pg/ml、80pg/ml、40pg/ml、0pg/ml
3. 加样与孵育
酶标板孔加入50μl标准品/待测样本
37℃孵育50分钟
洗板3次,每次浸泡1-2分钟
4. 检测抗体反应
每孔加入100μl化检测抗体工作液
37℃孵育50分钟
洗板3次
5. 显色与测定
每孔加入100μl SABC工作液,37℃孵育30分钟
加入TMB显色液,避光反应10-20分钟
加入终止液,15分钟内测定450nm吸光度。
操作步骤:
